1547 年復活節前後，約翰‧諾克斯來到蘇格蘭的聖安德魯斯城堡。他在城堡的小禮拜堂繼續為學生講解約翰福音，也在城裡的教區教堂，以問答的方式公開教導他們要理。幾位聽過他授課的人勸他承擔講道的職分，與傳道人約翰‧拉夫（John Rough）一同服事。諾克斯一再推辭，因為他認為自己還沒有領受這樣的呼召，不敢擅自承擔這職分。眾人便與弟兄們商議，決定由拉夫代表全體會眾，公開呼召他。這件事，諾克斯事先並不知情。到了約定的日子，拉夫以教會如何選立牧者為題講道。

講道結束後，拉夫轉向在場的諾克斯，奉上帝和祂兒子耶穌基督的名，囑咐他領受這神聖的呼召，為著上帝的榮耀、基督國度的擴展和弟兄們的造就，承擔公開講道的責任。隨後，拉夫轉身問會眾，這是否就是大家託付他說的話，大家是否也認可這個呼召。會眾同聲表示認可。面對這突如其來的鄭重託付，諾克斯想對眾人說幾句話，卻說不出口。他放聲大哭，衝出會場，把自己關在房裡。從那天起，直到他站上講台的那一天，他的神情舉止，都流露出內心的憂傷與不安。接連好些天，沒有人見他露出笑容，他也無心與人作伴。

據傳記作者托馬斯·麥克里記載，諾克斯想到自己要照管人的靈魂，將來要向群羊的大牧者交帳。即使聽眾不愛聽，他也有責任把上帝的旨意全然傳明，毫無保留。他知道，傳講這道可能招來逼迫、監禁、流放，甚至殺身之禍，也擔心自己在苦難中站立不住。後來，諾克斯確信是上帝呼召他承擔這職分，便倚靠那位在僕人的軟弱上顯出大能的主，決意忠心傳講上帝恩惠的福音。此後，即使在苦難最深的時候，他也未曾後悔當初的決定。